Baliqlarni tekshirish. Floresan in situ gibridizatsiyasi. FISH nima

Xuddi avvalgidek Janubiy Blotting Nukleotid zondlari DNK fragmentlarini aniqlash uchun ishlatilsa, sitogenetiklar xromosoma aberatsiyasini tahlil qilish uchun shunga o'xshash zondlardan foydalanishlari mumkin. Buning uchun slaydda mahkamlangan xromosomalarda joylashgan DNKga ega bo'lgan lyuminestsent zirk probi bilan yorliq qo'ying.

Ushbu texnika deyiladi Floresan in situ gibridizatsiyasi (BALIQ), interfazali xromatin yoki metafaza xromosomalarida joylashgan bo'laklar xromosoma DNKsi bilan gibridlanadigan yorliqli zond bilan davolash uchun slaydlarda bir joyda (in situ) mahkamlanadi va denatüre qilinadi. Xromosomalar ochiq rang bilan ochilganda prob floresanlanadi, bu esa floresan zirk paydo bo'lishiga olib keladi. Gibridizatsiya signalining joylashuvi va shuning uchun DNK segmentining gibridizatsiya probi bilan joylashishi mikroskopik tarzda aniqlanadi.

Zazvichiy uchun BALIQ tahlili vikory zondlari - bu xromosomada o'ziga xos pozitsiyaga ega bo'lgan DNK parchalari. Bunday zondlar gibridlanishdan o'tadi va teridagi gomologik xromosomadagi joyni belgilaydi, bu prob ketma-ketligining normal holatini ko'rsatadi. FISH probi mo'ylovli qo'ldan yoki butun xromosomadan olingan DNKni katlamali bo'lishi mumkin. Zond bilan duragaylashda butun xromosoma yoki biron bir qismi zond omborida saqlanadi.

Juda aqldan ozgan zondlar vidomi xromosoma zondlari sifatida. Odamlarda 24 xromosoma terisi uchun turli xil natijalarni beradigan floresan zirklarning turli kombinatsiyalari bilan etiketlangan 24 xil xromosoma zondlaridan foydalanish mumkinligi aniqlandi. Teri xromosomasi dowjin engil dumining xarakterli birikmasi bilan zond bilan ko'rsatiladi. Barcha 24 xromosoma problari metafaza xromosomalarini FISH tahlili uchun birlashtiriladi va vikorizatsiya qilinadi. Ushbu usul spektral karyotiplash (SKY) deb nomlanadi.

Teri bo'laklari va xromosomaga xos prob ishlatiladi floresans Dovjin hvilning kuchli birikmasi bilan turli xromosomalardan tashkil topgan mutant xromosomalar SKY tahlili vaqtida yaxshi ajratiladi va perebudova tarkibiga kirgan xromosomalarni osongina aniqlash mumkin. Nukleotidlarning uzluksiz ketma-ketligini, xromosomaga xos zondlarni va barcha xromosomalar uchun zondlar kombinatsiyasi bilan SKY usulini noyob tarzda aniqlaydigan FISH klinik sitogenetikada xromosoma aberatsiyasini, masalan, o'chirish, kiritish va translokalizatsiyani aniqlash uchun keng qo'llaniladi.

Ba'zi hollarda karyotipni aniqlash uchun sitogenetik tadqiqot etarli emas, bu hollarda molekulyar sitogenetik usullar, shu jumladan floresan in situ gibridizatsiyasi (FISH) qo'llaniladi.

Birinchi navbatda nuklein kislotalarning in situ gibridlanishiga asoslangan molekulyar sitogenetikaning yangi texnologiyalarining paydo bo'lishi xromosoma diagnostikasi imkoniyatlarini sezilarli darajada kengaytirdi. To'g'ridan-to'g'ri sitologik preparatlarda o'ziga xos DNK ketma-ketligini lokalizatsiya qilish uchun fragmentlarni in situ gibridizatsiya qilish usuli. Xromosomalar va xromosoma hududlarini aniqlashda xromosomaning sitologik tashkil etilishini tahlil qilishdan ularning omboriga kiritilgan DNK ketma-ketligini tahlil qilishgacha o'tish sodir bo'ldi. kabi xromosoma anomaliyalarini aniqlash va tahlil qilish uchun klassik sitologik usullarning samaradorligini tenglashtirish. differentsial to'siq Xromosomalar, hozirgi molekulyar sitogenetik texnologiyalardan foydalangan holda, gematologik kasalliklarda xromosomalarning sitologik tahlili spektral karyotiplash (SKY) jarayonida aniqlangan xromosoma anomaliyalarining faqat uchdan bir qismini aniqlaydi va aniqlaydi. Ishlarning yana uchdan bir qismi sitologik usullar bilan noto'g'ri aniqlangan, uchinchisi esa butunlay belgilanmagan. Klassik sitostatik usullar genetik tahlil SKY yordamida aniqlash mumkin bo'lgan xromosoma anomaliyalarining atigi 15 foizini aniqlash mumkin.

FISH usuli genlar yoki xromosomalarning omon qolishi uchun floresan molekulalarni aniqlaydi. Usul genlarni xaritalash va xromosoma aberatsiyasini aniqlash uchun ishlab chiqilmoqda.

Texnika maqsadni ifodalovchi DNK ketma-ketliklarini to'ldiruvchi problar deb ataladigan qisqa DNK ketma-ketliklarini tayyorlash bilan boshlanadi. Zondlar DNKning to'ldiruvchi bo'limlari bilan gibridlanadi (bog'lanadi) va shuning uchun ular floresan yorliq bilan belgilangan narsa DNK yoki xromosomalar yaqinida joylashgan genlarni lokalizatsiya qilishga imkon beradi. Hujayralarning faol to'plamini ajratib oladigan xromosoma payvandlashning boshqa usullaridan farqli o'laroq, FISH bo'linishni o'z ichiga olmaydigan hujayralarga joylashtirilishi mumkin, shuning uchun usul kamroq moslashuvchan.

FISH uch xil turdagi zondlar bilan turli maqsadlarda ishlatilishi mumkin:

• * Xromosomalarning ma'lum bo'limlari bilan bog'langan lokalizatsiyaga xos zondlar. Bu zondlar DNKning aniq qisqa ketma-ketligini aniqlash uchun ishlatiladi, bu yorliqli zondni tayyorlash va keyinchalik xromosomalar to'plami bilan gibridlanish uchun ishlatiladi;
• Alfaoid yoki markazdan qochma takroriy zondlar xromosomalarning markazdan qochma mintaqalarining takroriy ketma-ketligidir. Bu yordam yordamida teri xromosomasini boshqa rangda tayyorlash mumkin, bu esa xromosomalar sonini va ularning normal sonidan o'zgarishini tezda aniqlash imkonini beradi;
• Butun xromosoma uchun problar xromosomaning eng yaqin bo'limlarini to'ldiruvchi kichik zondlar to'plamidir va odatda butun xromosomani qoplaydi. Bunday zondlar kutubxonasidan foydalanib, butun xromosomani ajratib olish va bir kishi uchun differentsial spektral karyotipni olish mumkin. Ushbu turdagi tahlil xromosoma aberatsiyasini tahlil qilish uchun ishlatiladi, masalan, translokatsiya, bir xromosomaning qismlari boshqasining qo'liga o'tkazilganda.

Floresan teg (FISH) bilan in situ gibridizatsiya

Tekshiruv materialiga qon, miya omurilik suyuqligi, o'simta biopsiyasi, platsenta, homila to'qimasi va amniotik suyuqlik kiradi. Aybdorni tekshirish uchun namunalar yangi holatda laboratoriyaga yetkaziladi. Preparatlar (slayd) to'g'ridan-to'g'ri to'qimalar namunalaridan yoki ularni etishtirishdan keyin tayyorlanadi. Kltin metafazik va interfazik dorilar sifatida ishlatilishi mumkin. Floresan yorliqlari bilan yorliqlangan o'ziga xos DNK problari xromosoma DNK bilan gibridlanadi va bir nechta zondlar bir vaqtning o'zida turli lokuslarga mo'ljallangan bo'lishi mumkin.

FISH - katta va aniq xromosoma aberatsiyasini aniqlash uchun tez va sezgir sitogenetik tahlil usuli, masalan, deletsiyalar (shu jumladan, mikrodeletsiyalar), translokatsiyalar, subunitlar va anevloidiyalar. Interfaza xromosomalaridagi FISH 21, 18 yoki 13 xromosomalarning trisomiyalarini yoki davlat xromosomalarining aberratsiyasini prenatal diagnostika qilish uchun ishonchli usul bo'lib xizmat qiladi. Onkologiyada FISH yordamida gematologik bilan bog'liq bo'lgan bir qator translokatsiyalarni (bcr/abl, MLL, PML/RARA, TEL/AML1) aniqlash mumkin. yomon yangi ijodlar. Usul, shuningdek, kimyoterapiya va serebrovaskulyar transplantatsiyadan keyin ortiqcha onkologik kasalliklarni kuzatish va yosh bemorlar uchun noqulay prognoz bilan bog'liq bo'lgan ortib borayotgan onkogenlarni (c-myc / n-myc) aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. FISH, shuningdek, oldindan mavjud bo'lgan holatga ega bo'lgan odamdan olingan serebrovaskulyar allogreftning singdirishini kuzatish uchun ham qo'llaniladi.

FISH xromosoma aberratsiyasini aniqlash va ko'p (>500) hujayralarni tez va tezkor tahlil qilish uchun sezgir usuldir. Mayya usuli yuqori aniqlik xromosomalarning tabiatini va xromosoma DNKning noma'lum qismlarini aniqlashda.

Prenatal diagnostikaning invaziv usullari nafaqat kelajakda aniqlash va ishonchli tarzda yuborish, balki tug'ilmagan chaqaloqning intrauterin rivojlanishi bilan bog'liq kasalliklarni aniqlash, balki tug'ma patologiyalarning xarakteri va sabablarini aniqlash imkonini beradi.

Biroq, har qanday ma'lumot shoshilinch bo'lganidek qimmatlidir. Yakshcho til ketadi Xomilaning rivojlanishi bilan test natijalarini aniqlash tezligi hayotiy muhim bo'lib qoladi.

Shuning uchun embrionda rivojlanish anomaliyalari mavjudligini baholashga imkon beradigan FISH usuli ko'pincha maksimal darajada toraytiriladi. uslubiy atamalar, genetik diagnostika talablaridan tashqari

FISH qisqartmasi bo'lib, u xromosoma anomaliyalarini aniqlash texnologiyasining mohiyatini - "uy" sharoitida floresan gibridizatsiya - floresan gibridizatsiyani ochadi.

Bu usul J. Goll va M.-L tomonidan o'tgan asrning 70-yillari tamoyillariga asoslanadi. Pardyu nuklein kislotasi fragmentlari (DNK yoki RNK) ularning denaturatsiyasidan keyin ketma-ketligini yangilash imkoniyatiga asoslangan.

Mualliflar alohida-alohida yaratilgan etiketli DNK zondlarini (zondlar) va tahlil uchun olingan sitogenetik materialni qo'shimcha in situ gibridlashdan foydalanib, ajratilishi mumkin bo'lgan xromosomalarning nozik va aniq degeneratsiyasini aniqlashga imkon beradigan usulni ishlab chiqdilar.

O'tgan asrning oxirida, DNK problarini tayyorlash uchun floresan barnberries muvaffaqiyatli turg'unlikdan so'ng, FISH usuli o'z nomini yo'qotdi va o'sha paytdan boshlab intensiv ravishda tozalandi va xilma-xil bo'ldi.

FISH tahlilining joriy usullari tanlangan genetik materialni bitta duragaylash jarayonida tahlil qilish uchun maksimal ma'lumot olish imkonini beradi.

O'ng tomonda gibridlanishdan keyin bir xil sitogenetik materialdan xromosomalar sonini aniqlash mumkin. Qayta duragaylashdan oldin DNK nayzalari soni vaqti-vaqti bilan kamayadi.

Shu sababli, hozirgi vaqtda genetik diagnostikada 21, 13, 18-xromosomalarda, shuningdek X, Y davlat xromosomalarida eng keng tarqalgan anevloidalar haqida ovqatlanish uchun Shvetsiya turi uchun in situ gibridizatsiya usuli ko'pincha qo'llaniladi.

FISH usuli bilan tahlil qilish uchun har qanday to'qima yoki to'qima namunalari mos keladi.

Prenatal tashxis qon namunalari, eyakulyatsiya va boshqalarni o'z ichiga olishi mumkin.

Natijalarning izchilligi, tahlil qilish uchun olingan materialdan ajratilgan hujayralarni, klassik usulda bo'lgani kabi, ularni kerakli miqdorga kamaytirish, tirik muhitda etishtirishning hojati yo'qligi bilan ta'minlanadi.

Tanlangan material sof konsentrlangan tsellyuloza suspenziyasini olish uchun maxsus tayyorgarlikdan o'tadi. Keyinchalik, DNK zondini va namunaning nativ DNKsini bir nayzali holatga qadar denatüratsiya qilish jarayonini va gibridlanish jarayonini amalga oshiring, bu vaqtda DNK zondlari namunaning DNKsi bilan inkubatsiya qilinadi.

Shunday qilib, hujayralar xromosomalari ko'rinadi, ularning o'lchamlari baholanadi va ularning genetik tuzilishi aniqlanadi. Maxsus lyuminestsent mikroskopning okulyarasi DNKning porlab turgan chiroqlarini ko'rish imkonini beradi.

Hozirgi vaqtda FISH usuli diagnostik maqsadlarda irsiy kasalliklarni, reproduktiv tibbiyotda xromosoma aberatsiyasini, onkologiya, gematologiya, biologik dozimetriya va boshqalarni aniqlashda keng qo'llaniladi.

Xomilaning FISH diagnostikasini qanday amalga oshirish kerak?

Reproduktiv tibbiyot sohasida molekulyar sitogenetik diagnostika usullaridan biri sifatida FISH usuli barcha bosqichlarda qo'llaniladi.

• er-xotin.

Kelajakdagi otalarning karyotipini aniqlash uchun u bir marta amalga oshiriladi, chunki inson genomi hayot davomida o'zgarmaydi.

Bolani homilador qilishdan oldin er-xotinlarning karyotiplanishi tug'ilish paytida, shu jumladan tug'ilish paytida uzatiladigan genetik patologiyalari bo'lgan bolalar va otalarni aniqlashga yordam beradi. Shuningdek, kelajakdagi onalar va otalarning genomiga katta ta'sir ko'rsatadi, bu bolani homilador qilishning muvaffaqiyatiga va homiladorlikning aybiga ta'sir qilishi mumkin.

Ushbu turdagi FISH usuli bo'yicha tashxis ko'pincha klassik karyotiplashdan oldin qo'shimcha protsedura sifatida, tekshirilgan materialda (otaning venoz qoni) xromosoma patologiyalari aniqlanganda, zaitsizmga shubha qilingan holda amalga oshiriladi.

FISH usulining qo'shilishi bizga kelajakdagi otaning hujayralarida shubhali anomaliya mavjudligini ishonchli tasdiqlash yoki aniqlash imkonini beradi.

• Eyakulyatsiyani tekshirish.

Juft bo'lib ko'paytirishda qiyinchiliklar uchun ko'rsatilgan " inson omili" FISH usuli yordamida sperma tahlili g'ayritabiiy xromosomali spermatozoidlar sonini baholashga, shuningdek, ushbu maqolada aniqlangan genetik kasalliklarni qaysi shaxsga olib kelishini aniqlashga imkon beradi.

Agar er-xotin homilador bo'lishdan oldin EKZga borishga qaror qilgan bo'lsa, eyakulyatsiyaning FISH tahlili tuxumni urug'lantirish uchun eng kislotali spermani tanlash imkonini beradi.

• EKZ bilan.

Implantatsiyadan oldingi genetik diagnostika (PGD) uchun. Otalarning karyotipini kuzatish natijalari embrionga o'tishi mumkin bo'lgan xromosoma va genetik aberatsiyalarni ko'rsatadi.

FISH diagnostikasi, aniqlangan embrionlarning genetik sog'lig'ini nazorat qilish imkoniyatlari tufayli, uni sog'lom ko'rinadigan homilaning homilador bo'lishini ta'minlash uchun bo'sh bachadonga o'tkazishdan oldin bir yil ichida davolash mumkin.

Bundan tashqari, PGD imkoniyatlari sezilarli bo'lishi mumkin maqolaga tegishlilik embrionlar, keyin esa, agar kerak bo'lsa, kelajakdagi bola bo'lishni "o'rgating".

• Homiladorlik davrida, homiladorlik davrida.

Prenatal diagnostikada: FISH usuli yordamida qo'shimcha xorion villus biopsiyasi, amniyosentez yoki kordosentezdan so'ng olingan xomilalik hujayralarni tahlil qilish. tibbiyot markazlari klassikaga qo'shish uchun buni isbotlash uchun qo'ng'iroq qiling genetik tadqiqotlar Xomilalik hujayralar (karyotiplash).

Agar homilada eng katta xromosoma kengayishlari mavjudligini aniqlash kerak bo'lsa, bu usul ajralmas hisoblanadi: 21, 18, 13 xromosomalardagi trisomiyalar, X va Y xromosomalardagi aberatsiyalar va 14 bo 17), 15, 16 xromosomalardagi aneuploidiyalar.

FISH usuli yordamida tahlil qilishning afzalliklari

FISH usuli yordamida genetik tahlilni o'tkazish, garchi bugungi kunda xromosoma patologiyalarini tashxislash uchun qo'shimcha usulga ehtiyoj bo'lmasa-da, uni amalga oshirishning to'liqligi aniq afzalliklarga ega:

• Sinov qilingan xromosomalardan natijalarni olish tezligi bir necha yildan ortiq - 72 dan oshmaydi.

Genetika tashxisi biroz og'irlik qilishi muhim bo'lishi mumkin;

• FISH usulining yuqori sezuvchanligi va ishonchliligi - ahamiyatsiz miqdordagi biomaterialda muvaffaqiyatli tahlil qilish mumkin - bitta hujayra etarli, natijalarning og'ishi 0,5% dan oshmaydi.

Bu chiqish ko'z qorachig'i yaqinidagi bir qator hujayralarni o'rab olishda muhim bo'lishi mumkin, masalan, ularning bo'linishi yomon bo'lsa.

• homiladorlikning har qanday bosqichida (7 yoshdan boshlab) va har qanday biologik belgilar uchun FISH usuli yordamida diagnostika o'tkazish imkoniyati: xorion parchalari, amniotik suyuqlik, homila qoni va boshqalar.

FISH usuli yordamida diagnostika o'tkazishingiz mumkin

Moskvada homilaning xromosoma anomaliyalarini prenatal tashxislash uchun FISH usuli quyidagi tibbiyot markazlarida mavjud:

Qoida tariqasida, klinikalar qo'shimcha haq evaziga invaziv muolajalar orqali homilaning doimiy karyotiplanishi doirasida FISH diagnostikasi xizmatlarini taklif qiladi. Va, qoida tariqasida, kichkintoylaringiz uchun qo'shimcha pul to'lash yaxshi fikr va hatto FISH usuli bilan ham bir necha kun ichida siz kichkintoyingiz haqida ko'proq ma'lumot olishingiz mumkin.

FISH testi saratonga olib keladigan genetik omillarni, shu jumladan, aniqlash imkonini beradi samarali usul Turli xil saraton turlarini tashxislash Sinov tashxisni tasdiqlash uchun ham qo'llaniladi va kasallikning mumkin bo'lgan natijalari va kimyoterapiya davomiyligi haqida qo'shimcha ma'lumot olish imkonini beradi.

Masalan, ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarda biopsiya paytida olingan to'qimalarning FISH testi hujayralarda HER2 genining nusxalari mavjudligini aniqlashga yordam beradi.

HER2 genining nusxalari bo'lgan hujayralar ko'krakdagi saraton hujayralarining o'sishini rag'batlantiradigan signallarni bostiruvchi ko'proq HER2 retseptorlarini o'z ichiga oladi. Shuning uchun, HER2 genining nusxalari bo'lgan bemorlar uchun Herceptin (trastuzumab) ni qabul qilish kerak - HER2 retseptorlarining signallarni qabul qilish qobiliyatini inhibe qiluvchi usul.

FISH testining yuqori ishonchliligi va aniq foydalanish mumkin emasligi tufayli sut bezlari saratonini aniqlash uchun yana bir test - immunohistokotomiya (IHC) ko'pincha muvaffaqiyatsizlikka uchraydi.

Tibbiy kolalarda standart testlar bilan bir qatorda FISH testining yuqori samaradorligi uchun o'ta o'tkirlash belgilari mavjud. Biroq, texnologik taraqqiyot tufayli, FISH testi arzonlashmoqda va turli klinik aqllar uchun mavjud.

FISH testini qanday o'tkazish kerak

Bemorning to'qimalarida FISH testini o'tkazishda faqat xromosomalarning birinchi bo'limlari bilan bog'langan floresan belgilar aniqlanadi. Keyin flüoresan mikroskop yordamida lyuminestsent zondlar bog'langan xromosomalarning bo'limlari va saraton rivojlanishiga olib keladigan mumkin bo'lgan o'zgarishlarning mavjudligi aniqlanadi.

Saraton hujayralarida quyidagi belgilar paydo bo'lishi mumkin:

• translokatsiya - xromosoma segmentini bir xil yoki boshqa xromosomada yangi holatga o'tkazish;
• inversiya - xromosomaning yarmini saqlab qolish uchun xromosoma qismini 180 darajaga aylantirish;
• deletsiya - xromosomaning bir qismini yo'qotish;
• Duplikatsiya - xromosomaning bo'linishi, natijada hujayradagi gen nusxasi paydo bo'ladi.

Translokatsiyalar leykemiya, limfoma va sarkomaning turli turlarini aniqlashga yordam beradi. Sut yo'llarining saraton hujayralarida duplikatsiyani aniqlash shifokorlarga optimal davolanishni tanlashga yordam beradi.

FISH testining standart sitogenetik testlardan (hujayralarning genetik tarkibini kuzatuvchi) afzalligi shundaki, u bizga eng kichigini aniqlash imkonini beradi. genetik o'zgarishlar oddiy mikroskop bilan ko'rish mumkin emas.

FISH testining yana bir muhim afzalligi - uni hali faol rivojlana boshlamagan hujayralar ustida o'tkazish qobiliyati. Boshqa testlar hujayralar bo'yicha laboratoriya onglarida ikki yil davomida o'stirilgandan keyingina yakunlanadi, shuning uchun butun jarayon uch yilgacha davom etishi mumkin va FISH testining natijalari bir necha kun ichida ma'lum bo'ladi.

Saraton kasalligini aniqlash uchun FISH testidan foydalaning

FISH testi ko'pincha ko'krak bezi saratonidagi genetik omillarni tahlil qilish uchun ishlatilsa-da, u saratonning boshqa turlari haqida muhim ma'lumotlarni olishga yordam beradi.

Masalan, saraton kasalligini tashxislashda sich mikhur Hujayralar uchun FISH testi ko'proq beradi aniq natijalar atipik hujayralar bo'yicha quyi testlar Bundan tashqari, u 3-6 oy oldin sechomyel saratonining qaytalanishini aniqlash imkonini beradi.

FISH testi, shuningdek, leykemiya xromosomalari, shu jumladan hujayralardagi o'zgarishlarni aniqlashga yordam beradi, bu agressiv shaklni ko'rsatadi. surunkali limfotsitik leykemiya(HLL). CLL ning agressiv shakli bo'lgan bemorlar ehtiyotkorlik bilan davolashni talab qilishi mumkin, kamroq tajovuzkor shakllari esa etarlicha ehtiyotkorlikni talab qilishi mumkin.

FISH testi haqida super jo'jalar

Barcha mutaxassislar FISH testi Gerceptinga sezgir bo'lgan saraton turlarini tashxislash uchun eng aniq test ekanligiga qo'shilmaydi.

2010 yilda Mayo instituti (Irlandiya) tadqiqotchilari arzonroq IHC testi Gerceptin sezgirligini baholash uchun FISH testi kabi samarali bo'lishi mumkinligini ta'kidladilar.

Boshqa mutaxassislar FISH testini kichik o'chirishlar, qo'shishlar va nuqta mutatsiyalari kabi kichik mutatsiyalarni aniqlay olmasligi, shuningdek, ba'zi inversiyalarni e'tiborsiz qoldirishi uchun tanqid qiladi.

Yaxshilangan FISH testi

FISH test texnologiyasi hali xromosomalarning barcha bo'limlarini tahlil qilishga imkon bermasligidan qat'i nazar, u bu yo'nalishda asta-sekin rivojlanmoqda.

Misol uchun, 2007 yilda kanadaliklar vodiyda joylashgan qo'shimcha qurilma yordamida FISH testini o'tkazish imkonini beradigan mikroskop ob'ekti o'lchamidagi chipni ishlab chiqish haqida gapirishdi.

"Chiplarda FISH testi" deb nomlangan ushbu ilg'or test sizga bir kun ichida natijalarni olish imkonini beradi va boshqa testlarga qaraganda arzonroqdir.

FISH usuli (flüoresan in situ gibridizatsiyasi) 1986 yilda Livermor milliy laboratoriyasida (AQSh) ishlab chiqilgan. Bu tamoyil yangi usul Xromosomani payvandlash - bu maxsus molekulyar zondlar bilan in situ gibridizatsiya orqali DNKni floresan aniqlash usuli. Xromosoma DNKsining identifikatoriga asoslanish usuli komplementar xromosoma DNK ning nukleotid ketma-ketligini o'z ichiga olgan DNK bo'laklariga (DNK zondlariga) asoslangan. DNK problarini birinchi navbatda maxsus vositalar (masalan, biotin yoki digoksigenin) bilan yuvish kerak. Belgilangan DNK problari metafaza xromosomalarini gibridlash uchun tayyorlangan sitogenetik preparatlarga qo'llaniladi. Gibridlanish sodir bo'lgandan so'ng, preparatlar biotin yoki digoksigeninga tanlab qo'shilishi mumkin bo'lgan reagentlar bilan birlashtirilgan maxsus floresan barnacles bilan qoplangan. Teri xromosomasi o'ziga xos tuzilishga ega. Gibridizatsiya radioaktiv yorliqli zondlar yordamida ham amalga oshirilishi mumkin. Sitogenetik tahlil ultrabinafsha nurda lyuminestsent mikroskop ostida amalga oshiriladi.

FISH usuli fraksiyonel o'chirish va translokatsiyalarni aniqlash uchun ishlatiladi. Turli xil xromosomalar orasidagi xromosoma almashinuvi (translokatsiyalar va disentriklar) turli rangdagi tuzilmalar sifatida osongina aniqlanadi.

Robotning oxiri -

Ushbu mavzu ushbu bo'limga tegishli:

Asosiy modul. To'qimalarning biologiyasi

Vishchogo kasbiy ta'lim.. Boshqird davlat tibbiyot universiteti .. Sog'liqni saqlash va ijtimoiy rivojlanish vazirligi.

Agar sizga ushbu mavzu bo'yicha qo'shimcha material kerak bo'lsa yoki siz qidirayotgan narsangizni topa olmasangiz, bizning ma'lumotlar bazamizdan tezda qidirishni tavsiya qilamiz:

Olib tashlangan material bilan nima qilishimiz mumkin:

Agar ushbu material siz uchun qiziqarli bo'lsa, uni ijtimoiy tarmoqdagi sahifangizga saqlashingiz mumkin:

Tvit

Ushbu bo'limdagi barcha mavzular:

Asosiy modul. Yuridik va tibbiy genetika asoslari
(talabalar uchun uslubiy ko'rsatmalar) Boshlang'ich fan Biologiya Yo'nalishli tayyorgarlik uchun Likuvalna o'ngda

Laboratoriya ishlarini loyihalash qoidalari
p align="justify"> Ob'ektni mikroskopik bo'yashning zarur elementi uning albomdagi rasmidir. Meta-rasm kelajakdagi ob'ektni, boshqa tuzilmalarning shaklini yaxshiroq tushunish va xotirada mustahkamlashga yordam beradi.

Amaliy robot
1. “Klitini tsibulya shpal” vaqtga asoslangan preparatni tayyorlash Tsibulya shpalidan vaqt-soat tayyorlash uchun,

Sitoplazmatik membranalarning tuzilishi. Membrananing transport funktsiyasi
2. Boshlang'ich maqsadlar: Bilish: - universal biologik membrananing kelajagi - reagentlarning membranalar orqali passiv tashish qonuniyatlarini.

Budova eukariotlari. Sitoplazma va uning tarkibiy qismlari
2. Boshlang'ich maqsadlar: Bilish: - eukariot hujayralarni tashkil qilishning o'ziga xos xususiyatlarini; - sitoplazmada organoidlar qanday vazifani bajaradi.

Nutq moddalarining sintezida ishtirok etuvchi organoidlar
Har bir hujayrada yangi tuzilmalar uchun foydali material bo'lgan kuchli moddalar yoki biokimyoviy reagentlarda ishtirok etadigan fermentlar sintezi mavjud.

Quruq va o'simlik funktsiyalariga ega organoidlar
Lizosomalar Bu organellalar 20-asrning 50-yillariga toʻgʻri keladi, Belgiyalik biokimyogari de Duve jigar hujayralarining jigarida gidrolitik boʻlgan granulalarni aniqlagan.

Energiyadan mahrum bo'lgan hujayralar taqdirini o'z zimmasiga oladigan organoidlar
Muhimi shundaki, tananing aksariyat funktsiyalari behuda sarflangan energiya bilan bog'liq. Klitina tirik doimiy ravishda sodir bo'ladigan oksidlanish jarayonlari natijasida uni yaratadi

O'z taqdirini nasldan va Rossiyaning hujayralaridan oladigan organoidlar
Ularga klinik markaz va uning tarkibiy qismlari - vii va flagella orqali erishiladi. Klinik markaz Hayvonlarda va faoliyatda klinik markaz

Amaliy robot №1
1. Nerv to'qimalarining preparatida "O'murtqa ganglion hujayralarida Golji kompleksi" doimiy preparatining mikroskopik tahlili

Ribosomalar
Ular elektron mikroskop yordamida barcha protoeukaryotik organizmlar hujayralarida aniqlanadi, ularning kattaligi 8-35 nm, endoplazmatik chegaraning tashqi membranasiga yopishadi. U ribosomalarga ta'sir qiladi

Donador endoplazmatik to'r
Elektron mikrografiyada submikroskopik qisqa endoplazmatik chegaraga qarang. Ko'rshapalak subduktsiyasining uchta asinar hujayralari aniqlanadi. Oldin

Sitoplazmatik mikronaychalar
Barcha turdagi hayvonlar va o'sayotgan organizmlarning hujayralarida sitoplazmatik kanalchalar aniqlangan. Qalinligi 20-30 mikron, diametri 1 bo'lgan silindrsimon, ipga o'xshash buyumlar

To'qimalar va hujayralardagi mitotik faollik
Bu vaqtda hayvonlar va o'simliklarning ko'pgina to'qimalarida mitotik sikllar va mitotik faollik rejimi mavjud. Ma'lum bo'lishicha, teri to'qimalarida doimiy mitotik faollik mavjud. Taxminan m

Korinf kibulalari hujayralarida mitoz (bilvosita bo'linish).
Kam kattalashtiruvchi mikroskopdan foydalanib, sibul uchining ko'payish zonasini toping, faol bo'linadigan ko'rish maydonining markaziga yaxshi belgilangan tirnoqlari bo'lgan uchastkani joylashtiring. Keyin preparatni yuqori tezlikda sozlang

Misha jigar hujayralarida amitoz (to'g'ri etak).
Mishaning jigar hujayralarini yuqori kattalashtirish mikroskopida ko'ring. Klitini tayyorlashda boy qirrali shakl chizilgan. Bo'linmaydigan hujayralarda yadro yadro bilan yaxlitlanadi. Bo'linishi kerak bo'lgan hujayralar boshlandi

Syncarion ovum ascaris
Kam quvvatli mikroskop yordamida siz tuxumli follikullar bilan to'ldirilgan askaridaning bachadonini ko'rishingiz mumkin. Katta kuchga ega bo'lgan preparatni ko'rib chiqing. Tuxumlardagi sitoplazma siqilgan va sharsimon

DNK va RNKning tuzilishi va funksiyasi. Prota eukariotlarda genlar va gen ekspressiyasini tartibga solish. Oqsil biosintezining bosqichlari
2. Dastlabki maqsadlar: Dvoryanlar: - kimyoviy ombor va nuklein kislotalarning tashkil etilishining o'ziga xos xususiyatlari; - DNK va RNK o'rtasidagi farqlar;

Monogibrid kesishishlarda irsiy xarakterning namunalari. Allelik genlarning o'zaro ta'sir turlari
2. Dastlabki maqsadlar: Bilish: - monogibrid chatishtirish qonuniyatlarini; - Mendelning I va II qonunlari; - mutualizm turlari

Mustaqil meros belgisi qonuni. Alelik bo'lmagan genlar o'rtasidagi o'zaro ta'sir turlari
2. Dastlabki maqsadlar: Bilish: - poligibrid duragaylanish qonuniyatlarini; - Mendelning III qonuni; - mutualizm turlari

Ko'plik - tirikning kuchi, uning shakli. Fenotipik (modifikatsiya va tarqalmaydigan) xilma-xillik. Genotipik xilma-xillik
2. Boshlang`ich maqsadlar: Bilish: noxolislikning asosiy shakllari; - tan olishning kirib borishi va ekspressivligi haqidagi bayonotlarni rad etish

Ish haqi fondi nazorati ostida talabalarning mustaqil ishi
Amaliy ish O'zgaruvchanlikning sezilarli darajasi o'zgaruvchanlik koeffitsienti o'rta sinfning ongi uchun muhim ekanligini ko'rsatadi.

Naslchilik tahlili
Genetikaning barcha usullari odamlarda bu va boshqa xususiyatlarning pasayishini tahlil qilish uchun mos emas. Bir necha avlod qarindoshlarining fenotiplarini o'rganish orqali pasayish xarakterini aniqlash mumkin.

Inson genetikasini o'rganishning egizak usuli
Egizaklar usuli ma'lum bir belgi yoki kasallikning rivojlanishida genetik va atrof-muhit omillarining muhim rolini baholashga imkon beradi. Egizaklar monozigotik (bir xil) yoki dizigotik (bir xil) bo'lishi mumkin

Inson genetikasini o'rganish uchun dermatoglifik usul
Dermatoglifik tahlil barmoqlar, kaftlar va oyoqlarning papiller tizmalarini tekshirishni o'z ichiga oladi. Bu joylarda terilarda katta teri papillalari mavjud bo'lib, ularni qoplaydigan epidermis hosil qiladi

Ilg'or odam genetikasida sitogenetik usul
Odamlarda spazmodik patologiyani tashxislashning ko'plab usullari orasida sitogenetik usul muhim o'rin tutadi. Sitogenetik usuldan tashqari moddiy asosni ham tahlil qilish mumkin

Vivchennya xromosomalari to'plami
U ikki yo'l bilan amalga oshirilishi mumkin: 1) to'g'ridan-to'g'ri usul bilan - bo'linadigan hujayralardagi metafaza xromosomalarini tekshirish, masalan, serebellum (bu

Amaliy robot
1. "Odam karyotipi" ko'rgazmali preparatini sitogenetik laboratoriyada ko'rib chiqish X90 ortishi bilan leykotsitlar ko'rish sohasida ko'rinadi.

Xromosoma kasalliklari bo'lgan bemorlarda karyotip tahlili (fotosuratlar bilan)
№ 1. 13-xromosomada trisomiya (Patau sindromi). Karyotip 47 +13. No 2. 18-xromosomada trisomiya (Edvards sindromi). Karyotip 47 +18. № 3. 21-xromosomada trisomiya (Daun sindromi).

Barmoq izlari tahlilini o'tkazish
Nam, yumshoq barmoqlarni tayyorlash uchun sizga quyidagi jihozlar kerak bo'ladi: fotografik soxta, 20x20 sm2 maydonga ega bo'lak, ko'pikli kauchuk bo'lagi, drukarska farba (yoki shunga o'xshash)

Karyotipning sitogenetik tahlili (metafaza plitalarining mikrofotosuratlari yordamida)
1. Metafaza plitasi ustiga bo'yoq. 2. Xromosomalar sonini himoya qilish. 3. A (3 juft katta metasentrik xromosomalar), B (ikki juft katta xromosomalar) guruhlari xromosomalarini aniqlang.

Og'iz bo'shlig'i shilliq qavati epiteliysi yadrolarida X-holatli kromatinni aniqlashning ekspress usuli.
Chiqib ketishdan oldin bemordan yonoqning shilliq qavatini tishlari bilan tishlash so'raladi. ichki yuzasi Yonoqlarni doka servet bilan artib oling. Ushbu protsedura shikastlangan terini olib tashlash uchun zarur, g

Populyatsiya-statistik usul
Populyatsiya - bu bir hududda uzoq vaqt yashaydigan va shu turga mansub shaxslarning boshqa guruhlaridan ajratilgan, bir-biri bilan oson uchrashib, paydo bo'lishiga olib keladigan bir turdagi individlar yig'indisi.

Biokimyoviy usul
Biokimyoviy usullar ferment tizimlarining o'zgartirilgan faolligiga (yoki fermentning o'zi faolligiga yoki bu ferment tomonidan katalizlangan reaktsiyaning yakuniy mahsuloti soniga) asoslanadi. Biokimyoviy

Molekulyar genetik usul
Barcha molekulyar genetik usullar DNK tuzilishini o'zgartirishga tayanadi. DNK tahlilining bosqichlari: 1. Yadroni (qonni) olib tashlash uchun hujayralardan DNKni aniqlash.

DNK sintezi uchun polimeraza Lanzug reaktsiyasi
Polimeraza Lanczug reaktsiyasi (PLR) DNKni in vitroda kuchaytirish (ko'paytirish) usuli bo'lib, bir necha yillardan so'ng 80 gacha bo'lgan DNK parchasini aniqlash va ko'paytirish mumkin.

No PIB Genotip Ivanov AA Petrov Aa

Genotiplar va allellarning chastotalaridan ehtiyot bo'ling
Genotiplar, allellar Birodarlar soni Chastotasi (bo'limlarda) AA 1/5 = 0,2 AA

Genotiplar va allellarning chastotalarini taxmin qilish uchun ehtiyot bo'lish kerak
To'lqinlar soni himoyalangan. AA chastotasi (p2) aniqlanadi.

Genotiplar va allellarning chastotalaridan ehtiyot bo'ling
Yo'q. Tilni trubaga yutish aqlli Genotip Vmíyu (sic) A_