Фіш дослідження. Флюоресцентна гібридизація in situ. Що таке FISH

Подібно до того, як у ході Саузерн-Блоттінгнуклеотидні зонди використовують для ідентифікації фрагментів ДНК, цитогенетики можуть застосовувати подібні зонди для аналізу хромосомних аберацій. Для цього гібридизують мічені флюоресцентним барвником зонди з ДНК, що міститься у фіксованих хромосомах на предметному склі.

Ця техніка називається Fluorescence In Situ Hybridisation (FISH), оскільки , що міститься в інтерфазному хроматині або метафазних хромосомах, фіксована і денатурується на склі в одному місці (тобто in situ), для обробки міченим зондом, що гібридизується з хромосомною ДНК. Зонд флюоресціює при освітленні хромосом світлом із довжиною хвилі, що збуджує флюоресцентний барвник. Положення гібридизаційного сигналу та, таким чином, позицію сегмента ДНК з гібридизованим зондом визначають мікроскопічно.

Зазвичай для FISH-аналізувикористовують зонди - фрагменти ДНК, що мають унікальне положення у хромосомі. Такі зонди проходять гібридизацію та позначають місце в кожній гомологічній хромосомі, що відповідає нормальному положенню послідовності зонда. FISH-зонд може бути складною сумішшю ДНК, отриманої з усього плеча або навіть цілої хромосоми. Залежно від складу зонда при гібридизації з ним позначається вся хромосома або її частина.

Такі суміші зондіввідомі як хромосомні зонди. Нарешті, можна поєднати 24 різних хромосомних зонда, мічених різними комбінаціями флюоресцентних барвників, що випромінюють свічення різної довжини хвилі, для кожної з 24 хромосом людини. Кожна хромосома позначається зондом зі своєю характерною комбінацією довжин світлової хвилі. Всі 24 хромосомні зонди об'єднують і використовують для FISH-аналізу метафазних хромосом. Ця техніка відома як спектральне каріотипування (SKY).

Оскільки кожен хромосомоспецифічний зонд має флюоресценціюз власною комбінацією довжин хвиль, мутантні хромосоми, що складаються з різних хромосом, при SKY-аналізі добре розрізняються, а хромосоми, включені в перебудову, можуть бути легко ідентифіковані. FISH, що використовує поодиноку безперервну послідовність нуклеотидів, хромосомоспецифічні зонди та SKY-метод з комбінацією зондів для всіх хромосом, широко застосовують у клінічній цитогенетиці для виявлення хромосомних аберацій, таких як делеції, інсерції та транслокалізації.

У деяких випадках цитогенетичного дослідження буває недостатньо для видачі висновку про каріотип, у цих випадках використовують молекулярно-цитогенетичні методи, зокрема флуоресцентну гібридизацію in situ (англ. – Fluorescence In Situ Hybridization – FISH).

Поява нових технологій молекулярної цитогенетики, що базуються переважно на in situ гібридизації нуклеїнових кислот, значно розширила можливості хромосомної діагностики. Метод гібридизації in situ був розроблений для локалізації конкретних послідовностей ДНК безпосередньо на цитологічних препаратах. Відбувся перехід в ідентифікації хромосом та хромосомних районів з аналізу цитологічної організації хромосоми на аналіз послідовностей ДНК, що входять до їхнього складу. Порівняння ефективності класичних цитологічних методів виявлення та аналізу хромосомних перебудов, таких як диференціальні забарвленняхромосом, із сучасними молекулярно-цитогенетическими технологіями показало, що з гематологічних порушеннях цитологічний аналіз хромосом детектує і ідентифікує лише близько третини хромосомних перебудов, виявлених під час використання спектрального каріотипування (SKY). Ще близько третини перебудов ідентифікуються цитологічними методами невірно, а третина залишається зовсім непоміченою. Класичні методи цито генетичного аналізудозволяють виявляти лише близько 15% хромосомних перебудов, що ідентифікуються за допомогою SKY.

У методі FISH використовуються флуоресціюючі молекули для прижиттєвого забарвлення генів або хромосом. Метод використовується для картування генів та ідентифікації хромосомних аберацій.

Методика починається з приготування коротких послідовностей ДНК, які називаються зондами, які є комплементарними по відношенню до послідовностей ДНК, що представляють об'єкт вивчення. Зонди гібридизуються (зв'язуються) з комплементарними ділянками ДНК і завдяки тому, що вони позначені флуоресцентною міткою, дозволяють бачити локалізацію генів, що цікавлять, у складі ДНК або хромосом. На відміну від інших методів вивчення хромосом, що вимагають активного поділу клітини, FISH можна виконувати на клітинах, що не діляться, завдяки чому досягається гнучкість методу.

FISH може застосовуватися для різних цілей з використанням зондів трьох різних типів:

• * Локус-специфічні зонди, що зв'язуються з певними ділянками хромосом. Дані зонди використовуються для ідентифікації наявної короткої послідовності виділеної ДНК, яка використовується для приготування міченого зонда та його подальшої гібридизації з набором хромосом;
• альфоїдні або центромірні зонди-повтори є повторюваними послідовностями центромірних областей хромосом. З їхньою допомогою кожна хромосома може бути пофарбована в різний колір, що дозволяє швидко визначити число хромосом і відхилення від їх нормального числа;
• зонди на всю хромосому є набором невеликих зондів, комплементарних до окремих ділянок хромосоми, але в цілому покривають її довжину. Використовуючи бібліотеку таких зондів, можна «розфарбувати» всю хромосому і отримати диференціальний спектральний каріотип індивіда. Даний тип аналізу застосовується для аналізу хромосомних аберацій, наприклад, транслокацій, коли шматочок однієї хромосоми переноситься на плече іншої.

Гібридизація in situ з флуоресцентною міткою (FISH)

Матеріалом дослідження є кров, кістковий мозок, біопсія пухлини, плацента, ембріональні тканини чи амніотична рідина. Зразки для дослідження повинні доставлятися до лабораторії у свіжому вигляді. Препарати (слайди) готуються безпосередньо із зразків тканини або після їхнього культивування. Можуть використовуватися як метафазні, і інтерфазні препарати клітин. Мічені флуоресцентними мітками специфічні ДНК-зонди гібридизуються з хромосомною ДНК, причому можна одночасно використовувати множинні зонди до різних локусів.

FISH є корисним та чутливим методом цитогенетичного аналізу при виявленні кількісних та якісних хромосомних аберацій, таких як делеції (у тому числі і мікроделеції), транслокації, подвоєння та анеуплоїдії. FISH на інтерфазних хромосомах служить швидким методом пренатальної діагностики трисомій по 21, 18 або 13 хромосом або аберацій статевих хромосом. В онкології за допомогою FISH можна виявляти ряд транслокацій (bcr/abl, MLL, PML/RARA, TEL/AML1), пов'язаних із гематологічними злоякісними новоутвореннями. Метод також може використовуватися для моніторингу залишкових онкозахворювань після хіміотерапії та пересадки кісткового мозку та виявлення посилених онкогенів (c-myc/n-myc), пов'язаних з несприятливим прогнозом щодо деяких пухлин. FISH також використовується для контролю приживання алотрансплантата кісткового мозку, отриманого від індивіда протилежної статі.

FISH є чутливим методом для ідентифікації хромосомних аберацій та одномоментного швидкого аналізу великого (>500) числа клітин. Метод має високою точністюпри ідентифікації природи хромосом та невідомих фрагментів хромосомної ДНК.

Інвазивні методи пренатальної діагностики дозволяють не тільки зазирнути в майбутнє і достовірно передбачити, чи очікують ще ненародженого малюка захворювання, пов'язані з внутрішньоутробними вадами розвитку, а й з'ясувати характер і причини вроджених патологій.

Однак будь-яка інформація має цінність лише тоді, коли є своєчасною. Якщо мова йдепро стан розвитку плода, швидкість отримання результатів аналізів набуває життєво важливого значення.

Тому, FISH-метод, що дозволяє оцінити наявність у ембріона найчастіше зустрічаються аномалій розвитку максимально стислі терміни, дуже затребуваний у генетичній діагностиці

FISH – абревіатура, у розшифровці якої криється суть технології виявлення хромосомних аномалій – fluorescence in situ hybridization – флюоресцентної гібридизації у «домашньому» середовищі.

Цей прийом, запропонований наприкінці 70-х років минулого століття Дж. Голлом та М.-Л. Пардью заснований на можливості відновлення послідовності розташування фрагментів нуклеїнових кислот (ДНК або РНК) після їх денатурації.

Автори розробили метод, що дозволяє за допомогою гібридизації in situ штучно створених мічених ДНК-проб (зондів) та цитогенетичного матеріалу, взятого на аналіз, виявити кількісні та якісні відхилення хромосом, що цікавлять.

Наприкінці минулого століття, після успішного застосування для фарбування ДНК-зондів флуоресцентних барвників, FISH-метод отримав свою назву і з того часу інтенсивно вдосконалюється та варіатизується.

Сучасні методики FISH-аналізу прагнуть забезпечити можливість отримання максимально повної інформації для аналізу забраного генетичного матеріалу за одну процедуру гібридизації.

Справа в тому, що одного разу після гібридизації можна оцінити лише обмежену кількість хромосом одного й того ж цитогенетичного матеріалу. Здатність до повторної гібридизації ДНК-ланцюжків знижується від разу до разу.

Тому, на даний момент у генетичній діагностиці найчастіше метод гібридизації in situ застосовується для швидкої відповіді на питання про наявні, найпоширеніші анеуплоїдії по 21, 13, 18 хромосомах, а також по статевих хромосомах X, Y.

Для аналізу FISH-методом підходять будь-які тканинні чи клітинні зразки.

У пренатальній діагностиці це можуть бути зразки крові, еякулята, або .

Швидкість отримання результатів забезпечується тим, що клітини, отримані із забраного на аналіз матеріалу, не потрібно культивувати в поживних середовищах, домагаючись їх поділу до потрібної кількості, як при класичному способі каріотипування.

Відібраний матеріал проходить спеціальну підготовку для отримання чистої концентрованої клітинної суспензії. Далі проводять процес денатурації ДНК-проби та нативних ДНК досліджуваного зразка до одноланцюгового стану та процес гібридизації, під час якого забарвлені ДНК-зонди інкубуються з ДНК зразка.

Таким чином, візуалізуються шукані (забарвлені) хромосоми у клітині, оцінюється їх кількість, будова генетичних структур тощо. Розглянути ланцюжки ДНК, що світяться, дозволяє окуляр особливого флуоресцентного мікроскопа.

В даний час FISH-метод широко використовується в діагностичних цілях виявлення генетичних захворювань, хромосомних аберацій в репродуктивній медицині, онкології, гематології, в біологічній дозиметрії і т.п.

Як застосовують FISH-діагностику плода?

У сфері репродуктивної медицини FISH-метод, як один із прийомів молекулярної цитогенетичної діагностики, використовується на всіх етапах.

• парою.

Для визначення каріотипу майбутніх батьків проводиться один раз, оскільки геном людини незмінний протягом усього життя.

Каріотипування пари перед зачаттям дитини допоможе виявити чи є батьки носіями генетичних патологій, що передаються у спадок, у тому числі прихованих. А також загальний стан геному майбутніх мами та тата, який може вплинути на успішність зачаття малюка та виношування вагітності.

Діагностика FISH-методом у цьому випадку найчастіше виступає як додаткове обстеження до класичного каріотипування, при виявленні хромосомних патологій у досліджуваному матеріалі (венозній крові батьків), якщо є підозра на мозаїцизм.

Дообстеження FISH-методом дозволить достовірно підтвердити або спростувати наявність підозрюваної аномалії у клітинах майбутнього батька.

• Дослідження еякуляту.

Показано при труднощі з репродукцією в парі по « чоловічому фактору». Аналіз сперми FISH-методом дозволить оцінити рівень аномальних за хромосомним набором сперматозоїдів, а також визначити, чи є чоловік носієм генетичних захворювань, зчеплених зі статтю.

Якщо пара надалі вдасться до зачаття за допомогою ЕКЗ, FISH-аналіз еякуляту дозволить відібрати найбільш якісні сперматозоїди для запліднення яйцеклітини.

• При ЕКЗ.

Для передімплантаційної генетичної діагностики (ПГД). За результатами досліджень каріотипу батьків визначаються можливі хромосомні, генетичні абберації, які можуть бути передані ембріону.

Завдяки можливостям FISH-діагностики, дослідження генетичного здоров'я ембріонів, що утворилися, можна здійснити в лічені години до перенесення в порожнину матки, щоб забезпечити настання вагітності свідомо здоровим плодом.

Крім того, можливості ПГД дозволяють визначити статеву приналежністьембріонів, а отже, «замовити» стать майбутньої дитини, якщо це необхідно.

• У період виношування вагітності.

У пренатальній діагностиці: аналіз плодових клітин, отриманих за допомогою біопсії ворсин хоріону, амніоцентезу або кордоцентезу, методом FISH медичні центризазвичай пропонують на додаток до класичного генетичного дослідженняклітин плода (каріотипування).

Цей метод незамінний, коли необхідне швидке отримання відповіді про наявність у плода найбільш поширених хромосомних вад: трисомії по 21, 18, 13 хромосомах, абберацій в хромосомах X і Y, іноді анеуплоїдій по 14 (або 17), 15, 16 хромосом.

Переваги аналізу FISH-методом

Проведення генетичного аналізу FISH-методом, хоч і залишається на сьогоднішній день допоміжним методом діагностики хромосомних патологій, проте доцільність його проведення зумовлюють незаперечні переваги:

• швидкість отримання результатів, що стосуються хромосом, що тестуються, - протягом декількох годин - не більше 72-х.

Це може бути важливим, якщо від діагнозу генетиків залежить доля вагітності;

• висока чутливість і достовірність методу FISH - успішне проведення аналізу можливе на мізерно малій кількості біоматеріалу - достатньо однієї клітини, похибка результатів при цьому, не більше 0,5%.

Це може бути важливо при обмеженій кількості клітин у вихідному зразку, наприклад, при поганому їх розподілі.

• можливість проведення діагностики FISH-методом на будь-якому терміні вагітності (з 7-го тижня) та за будь-яким біологічним зразком: фрагменти хоріону, амніотична рідина, плодова кров тощо.

Де можна зробити діагностику FISH-методом

У Москві FISH-метод для пренатальної діагностики хромосомних відхилень плода застосовують у наступних медичних центрах:

Як правило, клініки пропонують послугу FISH-діагностики у рамках повного каріотипування плода шляхом інвазивного втручання за додаткову плату. І, як правило, майбутні батьки згодні доплатити, адже завдяки FISH-методу вже через пару діб можна дізнатися про свого малюка найголовніше

Оскільки FISH-тест дозволяє виявити генетичні відхилення, що викликають рак, він є ефективним методомдіагностики деяких видів раку Тест також використовується для підтвердження поставленого діагнозу і дозволяє отримати додаткову інформацію про можливий результат хвороби та доцільність застосування хіміотерапії.

Наприклад, у пацієнтів із раком молочної залози FISH-тест тканини, взятої при біопсії, допомагає визначити наявність у клітинах копій HER2-гену.

Клітини з копіями HER2-гену мають більше HER2-рецепторів, які отримують сигнали, що стимулюють зростання ракових клітин у молочній залозі. Тому для пацієнтів з копіями HER2-гену доцільно застосування герцептину (трастузумабу) – засоби, що пригнічує здатність HER2-рецепторів приймати сигнали.

Через високу вартість та відносну недоступність FISH-тесту частіше застосовують інший тест на виявлення раку молочної залози – імуногістохомію (ІГХ).

У лікарських колах точаться суперечки щодо високої ефективності FISH-тесту порівняно зі стандартними тестами. Однак завдяки технічному прогресу FISH-тест стає дешевшим і доступнішим у різноманітних клінічних умовах.

Як працює FISH-тест

При проведенні тесту FISH на зразку тканини пацієнта використовуються флуоресцентні мітки, які зв'язуються тільки з певними ділянками хромосом. Потім за допомогою флуоресцентного мікроскопа визначають ділянки хромосом, з якими зв'язувалися флуоресцентні зонди, та наявність можливих відхилень, що провокують розвиток раку.

У ракових клітинах можуть виявлятися такі відхилення:

• транслокація - перенесення ділянки хромосоми в нове положення на тій самій або іншій хромосомі;
• інверсія - розворот ділянки хромосоми на 180 градусів за збереження сполуки із самою хромосомою;
• делеція – втрата частини хромосоми;
• Дуплікація - подвоєння ділянки хромосоми, що призводить до надмірного вмісту копій гена в клітині.

Транслокації допомагають діагностувати деякі види лейкемії, лімфоми та саркоми. Наявність дуплікації у ракових клітинах молочної залози допомагає лікареві підібрати оптимальне лікування.

Перевага FISH-тесту перед стандартними цитогенетичними тестами (що досліджують генетичний склад клітин) полягає в тому, що він дозволяє визначити навіть найменші генетичні зміниякі не можна розглянути за допомогою звичайного мікроскопа.

Іншою важливою відмінністю FISH тесту є можливість його проведення на клітинах, які ще не почали активно розвиватися. Інші тести виконуються на клітинах тільки після їх зростання в лабораторних умовах протягом двох тижнів, тому весь процес може тривати до трьох тижнів, а результати тесту FISH стають відомими вже через кілька днів.

Приклади FISH-тесту для діагностики раку

Хоча FISH-тест найчастіше застосовується для аналізу генетичних відхилень при раку молочної залози, він також допомагає отримати важливу інформацію про інші види раку.

Наприклад, при діагностиці раку сечового міхура FISH-тест клітин сечі дає більше точні результатиніж тести на атипові клітини Крім того, він дозволяє визначити рецидив раку сечового міхура на 3-6 місяців раніше.

FISH-тест також допомагає виявити відхилення у хромосомах при лейкозі, включаючи клітини, що свідчать про агресивну форму хронічного лімфолейкозу(ХЛЛ). Пацієнтам з агресивною формою ХЛЛ може бути потрібне термінове лікування, у той час як при менш агресивних формах може бути достатньо спостереження.

Суперечки про FISH-тест

Не всі експерти погоджуються з тим, що FISH-тест є найточнішим аналізом для діагностики видів раку, сприйнятливих до герцептину.

У 2010 році вчені з інституту Mayo (Ірландія) заявили, що менш дорогий ІГХ-тест майже настільки ж ефективний для визначення сприйнятливості герцептину, як і FISH-тест.

Інші експерти критикують FISH-тест за неможливість виявлення малих мутацій, таких як невеликі делеції, вставки та точкові мутації, а також ігнорування деяких інверсій.

Удосконалення FISH-тесту

Незважаючи на те, що технологія FISH-тесту дозволяє аналізувати поки не всі ділянки хромосом, вона постійно розвивається в цьому напрямку.

Наприклад, у 2007 році канадські вчені оголосили про розробку чіпа розміром із предметне скло мікроскопа, який дозволить проводити FISH-тест за допомогою пристрою, що міститься в долоні.

Цей удосконалений тест, який отримав назву «FISH-тест на чіпі», дозволить отримати результати протягом одного дня і коштуватиме дешевше за інші тести.

Метод FISH-забарвлення (fluorescent in situ hybridization) розроблено у Ліверморській національній лабораторії (США) у 1986 р. Це принципово новий методВивчення хромосом – метод флюоросцентного виявлення ДНК шляхом гібридизації in situ зі специфічними молекулярними зондами. Метод заснований на здатності хромосомної ДНК зв'язуватися за певних умов із фрагментами ДНК (ДНК-зондами), які включають нуклеотидні послідовності комплементарні хромосомної ДНК. ДНК-зонди попередньо мітять спеціальними речовинами (наприклад, біотин або дигоксигенін). Мічені ДНК-зонди наносять на цитогенетичні препарати, підготовлені для гібридизації метафазних хромосом. Після того, як відбулася гібридизація, препарати обробляють спеціальними флюросцентними барвниками, кон'югованими з речовинами, здатними вибірково приєднуватися до біотину або дигоксигенін. Кожна хромосома має специфічне фарбування. Гібридизація може проводитися також із зондами міченими радіоактивною міткою. Цитогенетичний аналіз проводиться під люмінесцентним мікроскопом в ультрафіолетовому світлі.

FISH-метод використовується для виявлення дрібних делецій та транслокацій. Хромосомні обміни (транслокації та дицентрики) між різнобарвними хромосомами легко визначаються як різнокольорові структури.

Кінець роботи -

Ця тема належить розділу:

Навчальний модуль. Біологія клітини

Вищого професійної освіти.. башкирський державний медичний університет.. міністерства охорони здоров'я та соціального розвитку.

Якщо Вам потрібний додатковий матеріал на цю тему, або Ви не знайшли те, що шукали, рекомендуємо скористатися пошуком по нашій базі робіт:

Що робитимемо з отриманим матеріалом:

Якщо цей матеріал виявився корисним для Вас, Ви можете зберегти його на свою сторінку в соціальних мережах:

Твітнути

Всі теми цього розділу:

Навчальний модуль. Основи загальної та медичної генетики
(методичні вказівки для студентів) Навчальна дисципліна Біологія Для направлення підготовки Лікувальна справа

Правила оформлення лабораторної роботи
p align="justify"> Необхідним елементом мікроскопічного вивчення об'єкта є його замальовка в альбом. Мета замальовки - краще зрозуміти і закріпити в пам'яті будову об'єкта, форму окремих структур.

Практична робота
1. Приготування тимчасового препарату «Клітини плівки цибулі» Для того, щоб приготувати тимчасовий препарат із плівкою цибулі, зніміть

Структура цитоплазматичних мембран. Транспортна функція мембран
2. Навчальні цілі: Знати: - будова універсальної біологічної мембрани - закономірності пасивного транспорту речовин через мембрани

Будова еукаріотів. Цитоплазма та її компоненти
2. Навчальні цілі: Знати: - особливості організації еукаріотичних клітин; - будова та функцію органоїдів цитоплазми.

Органоїди, що беруть участь у синтезі речовин
У будь-якій клітині відбувається синтез властивих їй речовин, що є або будівельним матеріалом для новоутворюваних структур замість зношених, або ферментами, що беруть участь у біохімічних реагентах.

Органоїди із захисною та травною функцією
Лізосоми Ці органоїди відомі з 50-х років XX століття, коли бельгійський біохімік де Дюв виявив у клітинах печінки дрібні гранули, що містять гідролітичні

Органоїди, що беруть участь у енергозабезпеченні клітини
Переважна більшість функцій клітини пов'язані з витратою енергії. Жива клітинаутворює її в результаті постійно протікаючих окислювально-відновних процесів, що становить

Органоїди, що беруть участь у розподілі та русі клітин
До них відносяться клітинний центр та його похідні - вії та джгутики. Клітинний центр Клітинний центр є у тварин клітинах і в деяких

Практична робота №1
1. Мікроскопічний аналіз постійного препарату "Комплекс Гольджі в клітинах спинального ганглія" На препараті нервові клітини ім

Рибосоми
Виявляються за допомогою електронної мікроскопії у клітинах усіх організмів про- та еукаріотів, їх розмір 8-35 нм, вони прилягають до зовнішньої мембрани ендоплазматичної мережі. На рибосомах здійснюється з

Гранулярна ендоплазматична мережа
Розглянути субмікроскопічну будову шорсткої ендоплазматичної мережі на електронній мікрофотографії. Виявляються три ділянки ацинарних клітин підшлункової залози летючої миші. До

Цитоплазматичні мікротрубочки
Цитоплазматичні трубочки виявлені у клітинах усіх тварин та рослинних організмів. Це циліндричні, ниткоподібні утворення довжиною 20-30 мкм, діаметром 1

Мітотична активність у тканинах та клітинах
В даний час вивчені мітотичні цикли та режим мітотичної активності багатьох тканин тварин та рослин. Виявилося, що кожній тканині притаманний певний рівень мітотичної активності. Про м

Мітоз (непрямий поділ) у клітинах корінця цибулі
При малому збільшенні мікроскопа знайти зону розмноження кінчика цибулі, поставити в центр поля зору ділянку з добре помітними клітинами, що активно діляться. Потім налаштувати препарат на велике збільшення

Амітоз (прямий поділ) у клітинах печінки миші
Розглянути клітини печінки миші при великому збільшенні мікроскопа. На препараті клітини мають багатогранну форму. У клітинах, що не діляться, ядро ​​округле з ядерцем. У клітинах, що діляться, приступили до д

Синкаріон яйцеклітини аскариди
При малому збільшенні мікроскопа знайдіть зріз матки аскариди, наповненої фолікулами з яйцеклітинами. Розгляньте препарат при великому збільшенні. Цитоплазма в яйцеклітинах стискається і відшаровується про

Структура та функції ДНК та РНК. Будова генів та регуляція експресії генів про- та еукаріотів. Етапи біосинтезу білка
2. Навчальні цілі: Знати: - хімічний складта особливості організації нуклеїнових кислот; - відмінності між ДНК та РНК;

Закономірності наслідування ознак при моногібридному схрещуванні. Види взаємодії алельних генів
2. Навчальні цілі: Знати: - закономірності моногібридного схрещування; - І та ІІ закони Менделя; - види взаємодій

Закон незалежного наслідування ознак. Види взаємодії неалельних генів
2. Навчальні цілі: Знати: - закономірності ді- та полігібридного схрещування; - ІІІ закон Менделя; - види взаємодій

Мінливість як властивість живого, її форми. Фенотипова (модифікаційна чи неспадкова) мінливість. Генотипова мінливість
2. Навчальні цілі: Знати: основні форми мінливості; - отримати уявлення про пенетрантність та експресивність визнання

Самостійна робота студентів під контролем викладача
Практична робота Визначення ступеня варіабельності ознаки та коефіцієнта варіації залежно від умов навколишнього середовища.

Аналіз родоводів
Не всі методи генетики застосовуються до аналізу успадкування тих чи інших ознак у людини. Проте з дослідження фенотипів кількох поколінь родичів можна встановити характер спадкування

Близнюковий метод дослідження генетики людини
Близнюковий метод дозволяє оцінити відносну роль генетичних та середовищних факторів у розвитку конкретної ознаки або захворювання. Близнюки бувають монозиготні (однояйцеві) та дизиготні (раз

Дерматогліфічний метод дослідження генетики людини
Дерматогліфічний аналіз – це вивчення папілярних візерунків пальців, долонь та стоп. На цих ділянках шкіри є великі дермальні сосочки, а епідерміс, що їх покриває, утворює г

Цитогенетичний метод у дослідженні генетики людини
Серед багатьох методів вивчення спадкової патології людини цитогенетичний метод займає значне місце. За допомогою цитогенетичного методу можливий аналіз матеріальних основ

Вивчення хромосомного набору
Може проводитися двома способами: 1) прямим методом - дослідження метафазних хромосом у клітинах, що діляться, наприклад, кісткового мозку (іс

Практична робота
1. Перегляд демонстраційного препарату «Каріотип людини» у цитогенетичній лабораторії При збільшенні Х90 у полі зору видно лейкоцити

Аналіз каріотипу у хворих з хромосомними хворобами (за фотографіями)
№ 1. Трисомія по 13 хромосомі (синдром Патау). Каріотип 47 +13. № 2. Трисомія по 18 хромосомі (синдром Едвардса). Каріотип 47 +18. № 3. Трисомія по 21 хромосомі (хвороба Дауна).

Проведення дактилоскопічного аналізу
Для виготовлення власних відбитків пальців необхідне наступне обладнання: фотографічна ковзанка, скло площею 20х20 см2, шматок поролону, друкарська фарба (або аналогічна)

Цитогенетичний аналіз каріотипу (за мікрофотографіями метафазних пластинок)
1. Замалювати метафазну пластинку. 2. Підрахувати загальну кількість хромосом. 3. Ідентифікувати хромосоми груп A (3 пари великих метацентричних хромосом), В (дві пари великих

Експрес-метод дослідження Х-статевого хроматину в ядрах епітелію слизової оболонки ротової порожнини.
Перед взяттям зішкріба пацієнта просять обкусати зубами слизову оболонку щоки та внутрішню поверхнющоки протерти марлевою серветкою. Ця процедура необхідна для видалення зруйнованих клітин, г

Популяційно-статистичний метод
Популяція – це сукупність особин одного виду, які довго населяють одну територію, щодо ізольованих від інших груп особин даного виду, що вільно схрещуються між собою і дають п

Біохімічний метод
Біохімічні методи засновані на вивченні активності ферментних систем (або за активністю самого ферменту, або за кількістю кінцевих продуктів реакції каталізується цим ферментом). Біохімічна

Молекулярно-генетичний метод
У всіх молекулярно-генетичних методів лежить вивчення структури ДНК. Етапи аналізу ДНК: 1. Виділення ДНК із клітин, що містять ядра (крові

Полімеразна ланцюгова реакція синтезу ДНК
Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) - метод ампліфікації (розмноження) ДНК in vitro, за допомогою якого протягом декількох годин можна виявити і розмножити фрагмент ДНК, що цікавить, розміром від 80

№ п/п ПІБ Генотип Іванов АА Петров Аа

Спостерігаються частоти генотипів та алелей
Генотипи, алелі Число випадків Частота (у частках) АА 1/5 = 0,2 Аа

Спостерігаються та очікувані частоти генотипів та алелей
Спостерігається кількість випадків Спостережувана частота Очікувана частота АА (p2)

Спостерігаються частоти генотипів та алелей
№ в/п Уміння згортати мову в трубочку Генотипи Вмію (так) А_